免疫組化試劑盒檢測(cè)的原理是采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。計(jì)算方法是以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

　　免疫組化試劑盒在沒(méi)有去離子水或雙蒸水時(shí)，可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來(lái)水。

　　1.樣品稀釋?zhuān)好嘎?lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng)，如果血清不稀釋?zhuān)豢杀苊鈺?huì)產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng)，出現(xiàn)假陽(yáng)性。因此，國(guó)外檢測(cè)血清抗體的試劑盒，均規(guī)定將血清稀釋至適當(dāng)?shù)谋稊?shù)，以降低非特異性反應(yīng)，使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來(lái)。樣品稀釋倍數(shù)均通過(guò)大量試驗(yàn)確定，以保證試驗(yàn)的靈敏度和特異性。但是，有些用戶(hù)未能?chē)?yán)格按使用說(shuō)明書(shū)操作，如產(chǎn)品應(yīng)取10u1樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)瑐€(gè)別用戶(hù)取5u1甚至1u1樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)捎谖焐喜豢杀苊獾卣从袠悠芬约拔⒘恳埔浩鞯木炔粔颍虼嗽斐蓸悠废♂尡稊?shù)不準(zhǔn)確，檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)問(wèn)題。

　　2.試劑盒平衡：試劑盒中所有試劑和板條均應(yīng)在試驗(yàn)前平衡至室溫（約25℃），一般需在室溫放置20~30分鐘以上。平衡時(shí)間太短會(huì)造成試劑混勻不夠，樣品孵育時(shí)間相對(duì)縮短，ELISA反應(yīng)不夠充分。冬季室溫低，可將試劑盒打開(kāi)盒蓋置37℃溫箱20分鐘。稀釋前、后的樣品需要充分混勻，所有試劑在加樣前也須搖勻，以保證試驗(yàn)的均一性。

　　3.加樣：盡量操作規(guī)范，將液體垂直懸空快速加入到微孔板中，避免加到孔避上。加完試劑后用手適當(dāng)振蕩或在桌面適當(dāng)作圓周運(yùn)動(dòng)，使孔內(nèi)試劑充分混勻，蓋好蓋板膜。

　　4.洗板：洗液盡量不要溢出孔外；加洗液后要靜置10-15s，甩去板孔中洗液后，一定要用力拍干；及時(shí)更換吸水紙，尤其是拍過(guò)酶標(biāo)記物的吸水紙一定要棄去，否則可能影響試驗(yàn)結(jié)果。