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CAR-T細胞基因轉導

更新時間:2023-02-01   點擊次數:792次

轉染試劑


穩定轉染是效應T細胞穩定表達CAR的前提。目前用于CAR-T的基因轉導的方法主要有逆轉錄病毒轉導、慢病毒轉導和mRNA轉染。

Mirus公司的TransIT-VirusGEN®轉染試劑可提高載體轉染到貼壁或懸浮HEK 293細胞的效率,并有效提高重組腺相關病毒和慢病毒的產量。除了科研級別,Mirus還推出了臨床前級別的TransIT-VirusGEN® SELECT Transfection Reagent。TransIT-VirusGEN®SELECT轉染試劑優于PEI和PEIpro®試劑,是臨床前和早期臨床試驗中大規模病毒生產的理想選擇。Mirus也計劃推出GMP級別的TransIT-VirusGEN®轉染試劑。


產品優勢:


高效 — 實現高滴度病毒大規模生產中DNA高效轉染

驗證 — 經測試確認配方特性,無菌、低內毒素水平、無支原體

靈活 — 可與不同的重組病毒平臺和細胞培養系統兼容

安全 — 完quan合成的配方,無動物來源成分


CAR-T細胞基因轉導

分別使用T ® ransIT-VirusGEN SELECT Transfection Reagent ® (3:1, vol:wt), 25 kDa PEI (4:1, Polysciences) 和 PEIpro (2:1, Polyplus Transfection)將第三代載體pLKO.1-puro-CMVTurboGFP™和ViraSafe™ Pantropic Packaging mix (pRSV-Rev, pCMV-VSV-G, pCgpV, Cell Bio Labs)( 3:0.5:0.5:2 DNA ratio, 1 μg/ml total plasmid DNA)轉染至FreeStyle™ F17培養基中懸浮培養的FreeStyle™ 293-F細胞(A)和DMEM + 10% FBS中培養的貼壁293T/17細胞(C)生產慢病毒。用含病毒的上清液轉導293T/17細胞,并在轉導 ® 72小時后用Guava Easycyte™ 5HT流式細胞儀檢測GFP表達情況。

CAR-T細胞基因轉導

分別使用T ® ransIT-VirusGEN SELECT Transfection Reagent ® (2:1, vol:wt), 25 kDa PEI (2:1, Polysciences) 和 PEIpro (2:1 or 4:1, Polyplus Transfection)將pAAV-hrGFP, pAAV-RC和 pAAV Helper plasmids (1:1:1 DNA ratio, 1.5 μg/ml plasmid DNA, Agilent Technologies)轉染 至FreeStyle™ F17培養基中懸浮培養的FreeStyle™ 293-F細胞(B)及DMEM + 10% FBS中培養的貼壁293T/17細胞(D)生產腺相關病毒2型(AAV2)。用收集的病毒轉導HT ® 1080細胞,轉導48h后用Guava easyCyte™ 5HT流式細胞儀檢測GFP表達情況。慢病毒和AAV的功能滴度都是根據GFP陽性細胞少于20%的病毒稀釋度計算的。

TransIT-VirusGEN SELECT在懸浮和貼壁細胞培養系統中優于25 kDa線性PEI和PEIpro 轉染試劑


品牌產品編號產品名稱規格
MirusbioMIR 6700TransIT-VirusGEN® Transfection Reagent1.5 ml
MirusbioMIR 67030.3 ml
MirusbioMIR 67040.75 ml
Mirusbio

MIR 6705

5x1.5 ml
MirusbioMIR 670610x1.5 ml
MirusbioMIR 6730TransIT-VirusGEN® SELECT Transfection Reagent 30 ml

美國品牌Cellbiolabs可提供一系列用于病毒表達、病毒包裝、病毒濃縮和純化、病毒滴度檢測的研究工具。


病毒純化試劑盒


品牌
產品編號產品名稱規格產品特點
Cell BiolabsVPK-5112PureVirus™ Adenovirus Purification Kit10 preps操作時間小于2小時,無需超速離心,回收率>60%~70%
Cell BiolabsVPK-099ViraBind™ Adenovirus Miniprep Kit10 preps使用特殊離心柱,操作時間小于2小時,回收率>90%
Cell BiolabsVPK-140ViraBind™ AAV Purification Kit10 preps

用于純化AAV-2與AAV-DJ,3小時內獲得純度>95%的AAV病毒

Cell BiolabsVPK-140-T2 preps
Cell BiolabsVPK-141ViraBind™ AAV Purification Mega Kit
2 preps用于純化AAV-2與AAV-D,J 3小時內獲得純度>95%的AAV病毒,回收率>60%
Cell BiolabsVPK-141-510 preps


病毒滴度檢測試劑盒


品牌產品編號產品名稱規格產品特點
Cell Biolabs

VPK-107

VPK-107-5

VPK-107-T


QuickTiter™ Lentivirus Titer Kit 

(Lentivirus-Associated p24 ELISA)

96 assays

5x96 assays

32 assays

專li技術將慢病毒相關p24蛋白與游離p24蛋白分開,避免傳統方法檢測總P24蛋白導致的誤差
Cell BiolabsVPK-112QuickTiter™ Lentivirus Quantitation Kit20 assays

快速定量,操作過程45~60分鐘

可檢測純化前或純化后病毒核酸濃度

Cell BiolabsVPK-120QuickTiter™ Retrovirus Quantitation Kit20 assays

快速定量,操作過程45~60分鐘

可檢測純化前或純化后病毒核酸濃度來定量病毒滴度


Cell BiolabsVPK-110QuickTiter™ Adenovirus Titer ELISA Kit2x96 assaysELISA方法,無需空斑形成實驗,避免復雜的鋪瓊

脂步驟,操作更簡便,耗時更短

Cell BiolabsVPK-109

VPK-109-T

QuickTiter™ Adenovirus Titer Immunoassay Kit

100 assays

20 assays

免疫細胞化學方法,無需空斑形成實驗,避免復

雜的鋪瓊脂步驟,操作更簡便,耗時更短

Cell BiolabsVPK-106QuickTiter™ Adenovirus Quantitation Kit20 assays

快速定量,操作過程45~60分鐘

可檢測純化前或純化后病毒核酸濃度來定量病毒滴度

Cell BiolabsVPK-145QuickTiter™ AAV Quantitation Kit20 assays快速定量,操作過程小于2小時


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